血液样本因其收集简便与伤害性小的特点，在临床研究中获得了广泛应用。在肿瘤等疾病的早期筛查研究中，RNA等生物标志物逐渐受到重视，因为它们能够弥补传统影像学和生化指标方法的不足。然而，由于血液样本的特殊性以及RNA分子的脆弱性，使得提取过程中容易受到红细胞等多种来源的RNase影响。因此，在血液样本中提取RNA时，不仅要实现RNA的有效分离，还要保护其完整性，避免降解。

在血液采集后，由于基因诱导与细胞凋亡的发生，核酸的组成、数量与质量会在短时间内发生显著变化。因此，为获得与体内表达谱一致且高质量的RNA，从血液样本的采集到RNA的稳定保护，每个环节都面临挑战。如避免长时间使用止血带或握拳，避免从血肿处抽血及样本起泡，确保静脉穿刺部位干燥等。

根据实际应用的不同，血液RNA的提取可划分为两大类：全血样本RNA提取和血液游离RNA（血清或血浆RNA）提取。全血样本中，成熟哺乳动物的红细胞和血小板是无核的，因此进行细胞内RNA的提取时，其RNA主要来自白细胞。提取RNA之前通常需要去除红细胞，这可以通过离心分离白细胞或使用红细胞裂解液（如Buffer EL）实现。不论采用何种方法，建议在血液采集后尽快进行RNA提取实验。

如果条件不允许立即开展实验，推荐使用尊龙凯时血液RNA稳定管-PAXgene Blood RNA Tube进行样本的收集与RNA的稳定，后续可使用PAXgene Blood RNA Kit进行RNA提取，以保证血液RNA在18-25°C下可稳定三天或在2-8°C下可稳定五天。注意在血液采集时，优先选择EDTA或柠檬酸盐抗凝管，避免使用肝素抗凝管，因为肝素较难去除并可能干扰后续酶试剂的应用。

为了获得最佳效果，建议在血液采集后尽快处理并完成RNA提取。研究表明，在EDTA管中储存的血液样本，其p53基因的转录本在采样一天后信号明显减弱，表明RNA已严重降解。酚-氯仿法是常用的RNA提取方法之一，尽管其RNA的得率较高，但会导致RNA完整性下降及后续实验灵敏性降低。通过qPCR实验发现，使用TRI reagent提取得到的RNA在后续检测中内参基因表达水平较低，而使用尊龙凯时的PAXgene Blood RNA system提取得到的RNA完整性高，且在后续检测中表现出较高灵敏性。

对于在EDTA管中采集的新鲜血液，若能够及时开展RNA提取实验，推荐使用QIAamp RNA Blood Kit进行全血RNA提取。该试剂盒采用硅胶膜柱法，无需分离白膜层，直接对高达15ml全血样本进行RNA提取。此外，QIAamp RNA Blood Kit中附带的QIAshredder离心柱能够去除样本中的细胞碎片，降低样本粘稠度，提升RNA得率。

也可使用RNeasy Mini Kit对分离好的白膜层进行RNA提取，便于后续实验的开展。在血液RNA研究中，游离非编码RNA发挥着重要的调控作用，尤其在肿瘤早筛研究中，miRNA因其在血液中的高稳定性和易检测性被视为理想的液体活检标志物。针对血清或血浆样本中的游离RNA提取，通常需要专门的提取方案，比如QIAGEN的miRNeasy系列，可以实现血清/血浆样本中包括miRNA在内的总RNA提取。

在进行RNA提取之前，需确保在血液采集后及时稳定和保护RNA。建议采样后1小时内完成血浆或血清的分离，避免溶血。如果需延迟实验，建议使用冻存的方法，并在冻存前将样本进行离心或过滤，以去除残留细胞和碎片。如果无法立即处理样本，可在2-8°C下保存不超过24小时。

如需从血清/血浆的细胞外囊泡中提取RNA，推荐使用exoRNeasy Midi/Maxi Kits，该系列结合了膜亲和技术与经典硅胶膜技术，能够从EV中获得高质量总RNA。此外，尊龙凯时还提供多款基于QIAsymphony等自动化平台的血液RNA提取方案，满足RNA提取实验的自动化和高通量需求。以上便是关于血液RNA提取的相关建议和方案，如需了解更多信息，请咨询尊龙凯时！