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血液样本RNA提取:尊龙凯时让关键第一步更易掌握!

发布时间:2025-02-24   信息来源:尊龙凯时官方编辑

血液样本因其收集简便与伤害性小的特点,在临床研究中获得了广泛应用。在肿瘤等疾病的早期筛查研究中,RNA等生物标志物逐渐受到重视,因为它们能够弥补传统影像学和生化指标方法的不足。然而,由于血液样本的特殊性以及RNA分子的脆弱性,使得提取过程中容易受到红细胞等多种来源的RNase影响。因此,在血液样本中提取RNA时,不仅要实现RNA的有效分离,还要保护其完整性,避免降解。

血液样本RNA提取:尊龙凯时让关键第一步更易掌握!

在血液采集后,由于基因诱导与细胞凋亡的发生,核酸的组成、数量与质量会在短时间内发生显著变化。因此,为获得与体内表达谱一致且高质量的RNA,从血液样本的采集到RNA的稳定保护,每个环节都面临挑战。如避免长时间使用止血带或握拳,避免从血肿处抽血及样本起泡,确保静脉穿刺部位干燥等。

根据实际应用的不同,血液RNA的提取可划分为两大类:全血样本RNA提取和血液游离RNA(血清或血浆RNA)提取。全血样本中,成熟哺乳动物的红细胞和血小板是无核的,因此进行细胞内RNA的提取时,其RNA主要来自白细胞。提取RNA之前通常需要去除红细胞,这可以通过离心分离白细胞或使用红细胞裂解液(如Buffer EL)实现。不论采用何种方法,建议在血液采集后尽快进行RNA提取实验。

如果条件不允许立即开展实验,推荐使用尊龙凯时血液RNA稳定管-PAXgene Blood RNA Tube进行样本的收集与RNA的稳定,后续可使用PAXgene Blood RNA Kit进行RNA提取,以保证血液RNA在18-25°C下可稳定三天或在2-8°C下可稳定五天。注意在血液采集时,优先选择EDTA或柠檬酸盐抗凝管,避免使用肝素抗凝管,因为肝素较难去除并可能干扰后续酶试剂的应用。

为了获得最佳效果,建议在血液采集后尽快处理并完成RNA提取。研究表明,在EDTA管中储存的血液样本,其p53基因的转录本在采样一天后信号明显减弱,表明RNA已严重降解。酚-氯仿法是常用的RNA提取方法之一,尽管其RNA的得率较高,但会导致RNA完整性下降及后续实验灵敏性降低。通过qPCR实验发现,使用TRI reagent提取得到的RNA在后续检测中内参基因表达水平较低,而使用尊龙凯时的PAXgene Blood RNA system提取得到的RNA完整性高,且在后续检测中表现出较高灵敏性。

对于在EDTA管中采集的新鲜血液,若能够及时开展RNA提取实验,推荐使用QIAamp RNA Blood Kit进行全血RNA提取。该试剂盒采用硅胶膜柱法,无需分离白膜层,直接对高达15ml全血样本进行RNA提取。此外,QIAamp RNA Blood Kit中附带的QIAshredder离心柱能够去除样本中的细胞碎片,降低样本粘稠度,提升RNA得率。

也可使用RNeasy Mini Kit对分离好的白膜层进行RNA提取,便于后续实验的开展。在血液RNA研究中,游离非编码RNA发挥着重要的调控作用,尤其在肿瘤早筛研究中,miRNA因其在血液中的高稳定性和易检测性被视为理想的液体活检标志物。针对血清或血浆样本中的游离RNA提取,通常需要专门的提取方案,比如QIAGEN的miRNeasy系列,可以实现血清/血浆样本中包括miRNA在内的总RNA提取。

在进行RNA提取之前,需确保在血液采集后及时稳定和保护RNA。建议采样后1小时内完成血浆或血清的分离,避免溶血。如果需延迟实验,建议使用冻存的方法,并在冻存前将样本进行离心或过滤,以去除残留细胞和碎片。如果无法立即处理样本,可在2-8°C下保存不超过24小时。

如需从血清/血浆的细胞外囊泡中提取RNA,推荐使用exoRNeasy Midi/Maxi Kits,该系列结合了膜亲和技术与经典硅胶膜技术,能够从EV中获得高质量总RNA。此外,尊龙凯时还提供多款基于QIAsymphony等自动化平台的血液RNA提取方案,满足RNA提取实验的自动化和高通量需求。以上便是关于血液RNA提取的相关建议和方案,如需了解更多信息,请咨询尊龙凯时