### 人卵巢癌细胞A2780培养指南

#### 一、细胞培养条件

**细胞名称**: 人卵巢癌细胞A2780

**生长特性**: 贴壁生长

**冻存条件**: 无血清冻存液

**培养体系**: 1640培养基 + 10% FBS + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

**传代方法**: 建议第一次以1:2的比例进行传代。若细胞处于较好的传代状况，每两天更换培养液。

**备注**: 建议使用无菌离心管收集培养基，以便于后续对比培养，若对比效果不佳，推荐购买我们的完全培养基。

#### 二、细胞处理及培养步骤

收到细胞后，确保其培养在良好状态下，彻底注满完全培养液并密封瓶口是最佳的运输方式。在接收细胞时，用75%酒精消毒整个细胞瓶，并在超净台内进行无菌操作。之后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3至4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。借助显微镜观察细胞生长情况并按不同放大倍数拍照保存（最佳在40x、100x、200x下各一张）。前三天的照片将作为售后重要依据，如没有提供照片则默认收到状态良好。

在封存培养瓶时，请记得松开瓶盖。进行细胞传代时，一瓶使用原瓶完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基，以便于对比研究。

#### 三、细胞培养的具体步骤

细胞传代：

当汇合度未超过80%时，将培养液收集进离心管并留足5ml的完全培养基，放入37℃、5% CO2培养箱中待培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1至2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，置于37℃培养箱中消化1至2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻拍培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落并吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清后加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变化，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打使之脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液，混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若需转入液氮罐，需在-80℃中保存24小时以上。

细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（务必佩戴防护装备），快速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移入含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 隔天更换为新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

某些细胞在运输过程中易脱落，这是正常现象。提取所有培养液至离心管中，1000 RPM离心5分钟，将上清液用于对比培养。最终沉淀加入胰酶，经过短暂的消化和重悬后，按照1:2比例分瓶传代。

#### 五、售后条款

1）出现问题时可重发的情况包括：细胞运输途中的损坏、污染等，须在收到后的48小时内提供实验结果以便核实；2）若因客户原因导致的细胞污染或状态不佳则不予重发。

注意，**尊龙凯时**致力于为科研提供高质量细胞产品，若在使用过程中出现任何问题，欢迎联系我们以获得支持与帮助。