1. 目的细胞根据标准细胞培养方案，在含血清的培养基中进行培养。
2. 在检测前一天，使用无血清培养基（含0.2%BSA）进行处理。
3. 经过一夜的无血清培养后，吸出细胞培养基并用PBS进行冲洗。
4. 加入胰蛋白酶溶液，启动细胞分离过程。
5. 将细胞悬液转移至试管中，并在350×g条件下离心5分钟。
6. 将细胞重新放入预热的细胞培养基中。
7. 将细胞悬浮液稀释至接种密度为100000个细胞/ml。

1. 向接收板的每个孔中添加200μl含或不含化学引诱剂的培养基（不同浓度的FCS从0.25%到10%）。
2. 将准备好的细胞悬液以50μl的量加入膜板的各个孔中。
3. 将细胞培养板放置于37℃、5% CO2的培养箱中，培养24小时。

1. 从接收板的各个孔中吸出细胞培养基。
2. 向接收孔中加入150μl无血清培养基和8μM（DMSO中稀释）钙黄绿素AM。
3. 在37°C、5% CO2的培养箱中培养45分钟。
4. 从膜板及接收板的每个孔中吸出细胞培养基。
5. 用PBS冲洗两块板的孔。
6. 向接收板中加入胰蛋白酶溶液，以促进膜下侧迁移细胞的脱落。
7. 胰蛋白酶溶液孵育10分钟，期间轻轻摇动。
8. 将每孔180μl的胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色96孔微孔板的每孔。
9. 在激发波长为485nm，发射波长为520nm的读板器中读取荧光信号。

1. 从膜板的各个孔中吸出培养基。
2. 使用预湿的棉签，顺时针和逆时针方向轻轻旋转，以去除膜上未迁移的细胞。
3. 使用绿色通道的荧光显微镜检测膜下侧迁移细胞的荧光信号。值得注意的是，ThinCert®96孔HTS小室由于其独特的孔结构而提供了高透明度，这一特性有助于活细胞观察，用于检查细胞形态，评估细胞融合，以及更加准确可靠地进行污染监测。因此，每次实验都伴随着对细胞的持续显微镜监测。

在探索更有效的生物标志物、治疗靶点和药物以干预复杂现象（如肿瘤转移、血管生成和炎症性疾病）时，体外细胞迁移实验为研究提供了不可或缺的工具。这些实验提供了一个可控的环境，用于测定细胞迁移及分析不同分子（如生长因子和趋化因子）或候选药物的影响。在迁移实验中，孔径的选择至关重要。不同的孔径应与细胞的大小相符，以有效限制细胞的被动移动，同时又能支持其主动迁移。以下表格展示了一般膜孔径选择的建议，确保实验结果的可靠性和有效性。

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