尊龙凯时提供的RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养说明书涵盖了细胞的培养条件、处理步骤和售后服务条款，确保您在研究过程中获取最佳实验效果。

一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：建议进行1:2的传代，传代后每两天更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基以进行不同状态的对比培养。如果对比结果不理想，建议直接选购我们的完全培养基，以确保实验顺利进行。

二、细胞处理

收到细胞后，应将其培养至良好状态，再灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。在处理前，用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后放入37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时以稳定细胞状态。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍照记录不同倍数的细胞图像，以便提供售后依据。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未达到80%的汇合度，需将培养液收集至离心管，保持5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中继续培养；如密度超过80%，请按以下步骤进行传代：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入1-2ml的消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），在37℃下消化1-2分钟，观察细胞状态。当细胞大部分变圆并脱落后，快速加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000rpm下离心5分钟，弃去上清，加1-2ml的完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS冲洗一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻观察，待细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，再轻打使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清后，将细胞沉淀与1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001）混匀，并加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，须在-80℃下存放24小时后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴解冻，直至无结晶，擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重新悬浮细胞，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中。
4. 次日更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

细胞在运输中可能因贴壁不牢而脱落，请注意采取相应措施。建议收集所有培养液至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清进行对比培养，沉淀后加入胰酶消化，轻打后重悬，再离心，补充完全培养基重悬。然后按1:2比例进行传代培养。

五、售后条款

1. 可重发的情况

如细胞在运输中出现丢失、破损或培养液漏出，均可重发。细胞污染需在收到48小时内提供实验结果，经核实后可重发。若常温发货的细胞静置后存活率低于要求（需提供照片），或退回细胞在特定条件下出现污染，也可重发。细胞活性问题需在7天内提出并经过验证。

2. 不予重发的情况

如因客户操作不当或使用非推荐的培养体系导致细胞状态不良，皆不予重发。同样，在收到后48小时内未告知的问题，及进行其它处理的细胞也不予重发。

请务必遵循以上操作规范，从而确保您的实验顺利进行。对于进一步的支持和咨询，请随时与尊龙凯时联系。